cdna名詞解釋：cDNA(全稱complementary DNA)，是一種互補(bǔ)脫氧核糖核酸。與mRNA鏈互補(bǔ)的單鏈DNA，以其mRNA為模板，在適當(dāng)引物的存在下，由mRNA與DNA進(jìn)行一定條件下合成的，就是cDNA。
一、cDNA簡介
cDNA是指具有與某RNA鏈呈互補(bǔ)堿基序列的DNA。與RNA鏈互補(bǔ)的單鏈DNA，以其RNA為模板，在適當(dāng)引物的存在下，由依賴RNA的DNA聚合酶（反轉(zhuǎn)錄酶）作用而合成，并且在合成單鏈cDNA后，再用堿處理除去與其對應(yīng)的RNA以后，以單鏈cDNA為模板，由依賴DNA的DNA聚合酶或依賴RNA的DNA聚合酶作用合成雙鏈cDNA。在這種情況下，mRNA的cDNA，與原來的基因組DNA相同而且無內(nèi)含子；相反地，對應(yīng)于在原來基因中沒有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，與外顯子序列、先導(dǎo)序列以及后續(xù)序列等一起反映出mRNA結(jié)構(gòu)。
二、制備cDNA
制備互補(bǔ)DNA，往往需要先分離從目的基因轉(zhuǎn)錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質(zhì)是細(xì)胞中的主要蛋白質(zhì)，則此基因的產(chǎn)物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細(xì)胞而論，此細(xì)胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結(jié)合所表達(dá)的蛋白質(zhì)(抗原)，則可從沉淀的核糖體中分離出胰島素特異的mRNA，一般特異mRNA只是細(xì)胞總mRNA中的次要成分。在這種情況下，不得不以密度梯度離心，按分子量大小把總mRNA分開，然后把分離開的mRNA直接用于試管中表達(dá)蛋白質(zhì)(用家兔網(wǎng)織細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物或小麥胚芽提取物作為翻譯系統(tǒng)的誘導(dǎo)物)再用免疫沉淀或聚丙烯酰胺凝膠電泳從許多表達(dá)的蛋白中測定出目的蛋白，從而確定表達(dá)該蛋白的特異mRNA。
三、cDNA克隆
cDNA克隆( cDNA cloing)與RNA互補(bǔ)的雙鏈DNA片段，而且它能攜在克隆載體中。通常用于克隆真核生物mRNA的DNA拷貝。由于cDNA持貝是一個成熟的信息分子拷貝，因此，無內(nèi)含子順序。如果在其克隆的藏體中連上一個適當(dāng)?shù)幕顒幼有?，它可在任何宿主體內(nèi)得以迅速表達(dá)。
